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测定蛋白质含量的方法有哪些,其原理各是什么

 发布时间:2022-06-29 点击量:749

Bradford法测定蛋白质浓度
实验原理:
双缩脲法(Biuret法)和Folin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度*高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(max),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。

 

Bradford法的突出优点是:
(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其低值蛋白质检测量可达1g。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性*好。因而*不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
(3)干扰物质少,如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

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