分光光度计是利用分光光度法,通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。不同种类的分光光度计的基本原理相似,都是利用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源。光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,通过测量样品的吸光值,经过计算可以转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计的优点:
首先,它所采用的制作材料是非常的,这就保证了它的高质量。在检测物质的波长的时候,这种仪器有着非常高的度。这样,它所检测出来的结果跟实际情况当然就会更加接近了,这对于生产部门保证产品质量有非常重大的意义。
第二点就是分光光度计有着非常好的稳定性,它所使用的是超大的集成电路,这样的集成电路对机子运作的稳定性方面有很大的辅助作用。
第三点是分光光度计非常容易操作,一般的人员只要经过专业人员的培训就可以非常自如地操作。
zui后一点是分光光度计的使用寿命很长。包括紫外可见分光光度计等。只要机子能得到妥善的保养,不恶意地进行破坏,一般这种机子的寿命都比一般的仪器长很多。更重要的是,机子使用寿命的延长,在很大程度上还可以减少公司或者工厂的支出。
分光光度计时比较常用的也是比较简单的仪器设备。比如核酸的定量是使用分光光度计频率zui高的。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者zui头痛的问题。灵敏度越高的分光光度计,表现出的吸光值漂移越大。