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超微量分光光度计如何检测蛋白?

 发布时间:2022-07-18 点击量:426

蛋白和核酸不一样,具有很强的多样性。Protein A280功能应用于检测那些含有Trp、Tyr残基或者含有Cys-Cys二硫键的纯蛋白,这些蛋白在280nm吸光度明显。本机方法不需要构建标准曲线,而是检测吸光度后,直接计算蛋白浓度。

Protein A280显示紫外吸收光谱,检测280nm处的吸光度后计算浓度(mg/ml)。和核酸检测一样,Protein A280记录显示的是10mm光程下的数据。

Nano-600在基座模式下可以多检测90mg/ml的BSA而不用稀释。

当检测样品的吸光后的光强小于200时(10mm光程下),软件会提示用户选择更小的测量光程,以保证测试的准确性。

决定液体表面张力的主要因素是溶液中水分子之间的氢键,通常情况下,水中的物质,如蛋白、盐离子、去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说,1ul的量就足够用于检测了,但由于表面张力下降,我们建议使用2ul的量以保证形成液柱。

可选择或取消基线校准。蛋白检测默认的基线校准波长为340nm,用户可根据试验需要输入不同的校准波长。在任何情况下,基线都自动设定为选择波长下的吸光度,所有波长的吸光度读数都是减去这个值的结果。

注意:基线校准必须在进行样品检测之前设定,样品检测之后设定无效。不选择基线校准,光谱值将会产生偏移,计算的浓度也会改变。

⑵操作步骤:

①设定项目名称和样品编号与蛋白类型;

②使用缓冲液建立空白对照:取2ul空白溶液加到下基座上,放下上基座并点击“空白";

③使用干净无尘布把基座上的空白溶液擦干净;

④取2ul样品滴加到下基座上,放下上基座,点击“样品"进行检测;

注意:每次检测的样品都必须是刚加入的。

⑤检测完成后,必须用干净的无尘布擦掉上下基座上的样品,才可以检测下一个样品。


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